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DEAE-瓊脂糖凝膠FF的使用方法是什麼☁│▩▩╃?
釋出時間│╃:2022-09-08   點選次數│╃:58次

DEAE-瓊脂糖凝膠FF的使用方法是什麼☁│▩▩╃?


上海信帆生物供應DEAE-瓊脂糖凝膠FF✘☁│·•,產品質量穩定✘☁│·•,庫存充足▩·☁╃!


DEAE-瓊脂糖凝膠FF

產品簡介│╃:

DEAE-瓊脂糖凝膠FF 是將二乙胺基乙基鍵合在快流速瓊脂糖凝膠上形成的一種弱陰離子交換

介質✘☁│·•,具有優異的流動效能✘☁│·•,廣泛用於生物製藥和生物工程下游蛋白質╃↟◕╃、核酸及多肽的離子交換制

備✘↟。

1 理化指標

專案指標

離子交換基團-O-CH2CH2-N+(C2H5)2H

離子交換型別弱陰離子✘☁│·•,可交換離子Cl-

基質6%交聯瓊脂糖

蛋白質吸附容量95mgHSA/ml 介質

總離子交換容量0.09~0.13 mmol/ml 介質

粒徑45~165 μm

最大流速* 300cm/h

工作溫度4~40℃

耐壓0.3 MPa

pH 穩定性1~14 (短時間);3~12 (長時間)

pH 工作範圍2~9

化學穩定性

所有常用的水相緩衝液;0.1mol/L 氫氧

化鈉;

*檢測條件│╃: 層析柱16mm×100mm *柱床高5cm✘☁│·•,25℃✘☁│·•,流動相為0.1mol/LNaCl✘↟。

2 貯存

產品應密封貯存在4℃~25℃(儲存溶液為20% 乙醇)✘☁│·•,通風╃↟◕╃、乾燥╃↟◕╃、清潔的地方✘↟。不能冷凍✘↟。

用過的柱子貯存在4℃(20% 乙醇)✘↟。

3 應用

本產品具有高化學穩定性╃↟◕╃、高流速╃↟◕╃、高載量╃↟◕╃、好的機械效能╃↟◕╃、可在位清洗╃↟◕╃、多次重複使用等

特點✘☁│·•,非特異性吸附低✘☁│·•,回收率高✘☁│·•,適用於工業規模生產✘☁│·•,適用於在pH 工作範圍內可形成負離子

的生物大分子的分離純化✘☁│·•,廣泛用於生物製藥和生物工程下游蛋白質╃↟◕╃、核酸及多肽的離子交換製備✘↟。

4 使用方法

4.1 裝柱

1)將所有實驗材料均需平衡至進行色譜層析操作的溫度;

第2頁✘☁│·•,共2 頁

2)實驗所需要用到的緩衝液以及洗脫液進行脫氣處理;

3)DEAE-瓊脂糖凝膠FF 的儲存液為20%乙醇✘☁│·•,需要用去離子水徹底清洗掉儲存液✘↟。

4)在柱子下端加入純水裝柱子✘☁│·•,以排除氣泡✘☁│·•,將填料連續倒入柱子時✘☁│·•,要用玻璃棒緊靠柱子

內壁引流✘☁│·•,以減少氣泡的產生✘☁│·•,讓填料先自然沉降到填料體積不再變化✘☁│·•,用上樣的平衡液平衡柱後

即可上樣✘↟。

4.2 平衡

讓平衡緩衝液以一定流速流過柱子✘☁│·•,到流出液電導和pH 不變✘↟。平衡液是低濃度的緩衝溶液✘☁│·•,

如Tris ╃↟◕╃、PBS 等✘↟。

4.3 上樣

(1)樣品用平衡液配製✘☁│·•,渾濁的樣品要離心和過濾後上樣✘↟。鹽濃度太大的樣品處理後再配✘↟。

(2)一般情況是讓目標產品結合在柱子上✘☁│·•,用平衡液洗去雜質✘☁│·•,再選擇一種洗脫液洗下目標產品✘↟。

(3)介質對樣品組分吸附的程度取決於樣品的帶電性質╃↟◕╃、流動相的離子強度和pH 值✘↟。鹽濃度小✘☁│·•,

介質對樣品組分吸附較牢✘↟。用DEAE 介質時✘☁│·•,推薦的pH 值是至少大於目標產品等電點1 個單位✘↟。

4.4 洗脫

DEAE 介質可用增大鹽濃度或減小pH 值進行洗脫✘☁│·•,常用增大鹽濃度的辦法洗脫✘↟。

4.5 再生

一般用高鹽濃度的緩衝液(含1~2mol/L NaCl)洗或減小pH 洗10 倍以上柱體積✘☁│·•,接著用結合

蛋白的平衡液洗到平衡✘☁│·•,可再次使用✘↟。

若有失活蛋白質或脂類物質在再生時洗不掉✘☁│·•,可用在位清洗(CIP)除去✘↟。

4.6 在位清洗

(1)對於以離子鍵結合上去的蛋白✘☁│·•,可以用2M Nacl 去除✘↟。

(2)對沉澱蛋白╃↟◕╃、對以疏水性結合的蛋白或脂類✘☁│·•,可用0.1M NaOH 去除✘↟。

(3)對強疏水性結合的蛋白╃↟◕╃、脂類等✘☁│·•,用4~10 倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗✘☁│·•,但要注

意有機溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加✘☁│·•,否則容易產生氣泡✘↟。

清洗完畢後✘☁│·•,用至少10 倍緩衝液平衡柱子✘↟。

4.7 注意

在裝柱╃↟◕╃、使用和儲存柱子的時候✘☁│·•,要避免柱子流乾✘☁│·•,氣泡進入✘↟。

注意事項│╃:

1. 上樣之前✘☁│·•,樣品必須經過膜過濾及去除色素✘☁│·•,否則雜質及色素會被吸附到填料上✘☁│·•,影響填料的

正常使用✘↟。

2. 在使用過程中✘☁│·•,避免使用高濃度的強酸強鹼✘☁│·•,酸和鹼的濃度應低於0.15 摩爾✘↟。鹼會使流速變慢✘↟。

3. 離子交換介質在選擇層析柱時✘☁│·•,避免使用細長柱✘☁│·•,會增加實驗操作壓力✘↟。

4. 不同的樣品✘☁│·•,平衡✘☁│·•,吸附和洗脫方法不相同✘☁│·•,可以根據相關的文獻進行✘↟。


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