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人促卵泡素(FSH)ELISA檢測試劑盒的使用方法
釋出時間₪◕☁:2022-08-25   點選次數₪◕☁:63次

人促卵泡素(FSH)ELISA檢測試劑盒的使用方法


人促卵泡素(FSHELISA檢測試劑盒

使用說明書

檢測原理

試劑盒採用雙抗體夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)▩✘。往預先包被人促卵泡素(FSH)捕獲抗體的包被微孔中▩↟,依次加入標本☁₪••、標準品☁₪••、HRP標記的檢測抗體▩↟,經過溫育並徹底洗滌▩✘。用底物TMB顯色▩↟,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色▩↟,並在酸的作用下轉化成最終的黃色▩✘。顏色的深淺和樣品中的人促卵泡素(FSH)呈正相關▩✘。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值)▩↟,計算樣品濃度▩✘。

樣品收集☁₪••、處理及儲存方法

1.  血清₪◕☁:使用不含熱原和內毒素的試管▩↟,操作過程中避免任何細胞刺激▩↟,收集血液後▩↟,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離▩✘。

2.  血漿₪◕☁:EDTA☁₪••、檸檬酸鹽或肝素抗凝▩✘。3000轉離心30分鐘取上清▩✘。

3.  細胞上清液₪◕☁:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物▩✘。

4.  組織勻漿₪◕☁:將組織加入適量生理鹽水搗碎▩✘。3000轉離心10分鐘取上清▩✘。

5.  儲存₪◕☁:如果樣本收集後不及時檢測▩↟,請按一次用量分裝▩↟,凍存於-20℃▩↟,避免反覆凍融▩↟,在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍▩✘。

自備物品

1.     酶標儀(450nm

2.     高精度加樣器及槍頭₪◕☁:0.5-10uL☁₪••、2-20uL☁₪••、20-200uL☁₪••、200-1000uL

3.     37恆溫箱

操作注意事項

1.  試劑盒儲存在2-8▩↟,使用前室溫平衡20分鐘▩✘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶▩↟,這屬於正常現象▩↟,水浴加熱使結晶完全溶解後再使用▩✘。

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中▩↟,密封(低溫乾燥)儲存▩✘。

3.  預處理後的樣本無需稀釋▩↟,直接取10μL加樣即可▩✘。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間☁₪••、加液量及順序進行溫育操作▩✘。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻▩✘。

試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備註

微孔酶標板

12孔×8

12孔×4

標準品

0.3mL

0.3mL

樣本稀釋液

6mL

3mL

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩衝液

25mL

15mL

按說明書進行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2

2

說明書

1

1

自封袋

1

1

注₪◕☁:標準品濃度依次為₪◕☁:16☁₪••、8☁₪••、4☁₪••、2☁₪••、1☁₪••、0 mIU/mL.

試劑的準備

20×洗滌緩衝液的稀釋₪◕☁:蒸餾水按1₪◕☁:20稀釋▩↟,即1份的20×洗滌緩衝液加19份的蒸餾水▩✘。


洗板方法

1.  手工洗板₪◕☁:甩盡孔內液體▩↟,每孔加滿洗滌液▩↟,靜置1min後甩盡孔內液體▩↟,在吸水紙上拍幹▩↟,如此洗板5次▩✘。

2.  自動洗板機₪◕☁:每孔注入洗液350μL▩↟,浸泡1min▩↟,洗板5次▩✘。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需板條▩↟,剩餘板條用自封袋密封放回4℃▩✘。

2.  設定標準品孔和樣本孔▩↟,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL

3.  待測樣本孔先加待測樣本10μL▩↟,再加樣本稀釋液40μL

4.  隨後標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL▩↟,用封板膜封住反應孔▩↟,37℃水浴鍋或恆溫箱溫育60min▩✘。

5.  棄去液體▩↟,吸水紙上拍幹▩↟,每孔加滿洗滌液▩↟,靜置1min▩↟,甩去洗滌液▩↟,吸水紙上拍幹▩↟,如此重複洗板5次(也可用洗板機洗板)▩✘。

6.  每孔加入底物A☁₪••、B50μL▩↟,37℃避光孵育15min▩✘。

7.  每孔加入終止液50μL▩↟,15min內▩↟,在450nm波長處測定各孔的OD值▩✘。

結果判斷

繪製標準曲線₪◕☁:在Excel工作表中▩↟,以標準品濃度作橫座標▩↟,對應OD值作縱座標▩↟,繪製出標準品線性迴歸曲線▩↟,按曲線方程計算各樣本濃度值▩✘。


試劑盒效能

1. 準確性₪◕☁:標準品線性迴歸與預期濃度相關係數R值▩↟,大於等於0.9900▩✘。

2. 靈敏度₪◕☁:檢測濃度小於0.1 mIU/mL▩✘。

3. 檢測範圍₪◕☁:0.5 mIU/mL - 16 mIU/mL                                            

4. 特異性₪◕☁:不與其它可溶性結構類似物交叉反應▩✘。

5. 重複性₪◕☁:板內變異係數小於10%☁₪••、板間變異係數小於15%▩✘。

6. 貯藏₪◕☁:2-8▩↟,避光防潮儲存▩✘。

7. 有效期₪◕☁:6個月

免責宣告

1.  試劑盒僅供研究使用▩↟,不得用於臨床實驗或人體實驗▩↟,否則所產生的一切後果▩↟,由實驗者承擔▩↟,本公司概不負責▩✘。

2.  嚴格按照說明書操作▩↟,實驗者違反說明書操作▩↟,後果由實驗者承擔▩✘。


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