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人雌二醇(E2) ELISA試劑盒,*

人雌二醇(E2) ELISA試劑盒,*

簡要描述▩▩:

上海信帆生物科技有限公司是一家的ELISA試劑盒供應商╃↟,提供ELISA試劑盒╃↟,生化法試劑盒,放免試劑盒等.全程提供技術指導╃↟,提供售後服務╃↟,有質量問題免費包退換╃↟,免除您實驗的後顧之憂│·。如有需要歡迎╃↟,也可以索要試劑盒說明書│·。人雌二醇(E2) ELISA試劑盒,*│·。

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所有產品僅供科研使用╃↟,不能用於食用和醫療等

人雌二醇(E2) ELISA試劑盒,*

人雌二醇(E2) ELISA試劑盒

本試劑盒用於測定血清╃↟,血漿及相關液體樣本中小鼠雌激素(E)的含量│·。

ELISA技術原理▩▩:以免疫學反應為基礎╃↟,將抗原✘│↟││、抗體的特異性反應與酶對底

物的高效催化作用相結合起來

1. 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記│·。

2. 結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性│·。

3. 酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性╃↟,又保留酶的活性│·。

4. 受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應│·。再加入酶標記 的抗原或抗體╃↟,也透過反應而結合在固相載體上│·。

5. 此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例│·。

6. 加入酶反應的底物後╃↟,底物被酶催化成為有色產物╃↟,產物的量 與標本中受檢物質的量直接相關╃↟,故可根據呈色的深淺進行定 性或定量分析│·。測定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水 平)╃↟,並且重複性好│·。


人雌二醇(E2) ELISA試劑盒,*

樣本處理及要求▩▩:

1. 血清▩▩:室溫血液自然凝固10-20分鐘╃↟,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)│·。仔細收集上清╃↟,儲存過程中如出現沉澱╃↟,應再次離心│·。

2. 血漿▩▩:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑╃↟,混合10-20分鐘後╃↟,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)│·。仔細收集上清╃↟,儲存過程中如有沉澱形成╃↟,應該再次離心│·。

3. 尿液▩▩:用無菌管收集╃↟,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)│·。仔細收集上清╃↟,儲存過程中如有沉澱形成╃↟,應再次離心│·。胸腹水✘│↟││、腦脊液參照實行│·。

4. 細胞培養上清▩▩:檢測分泌性的成份時╃↟,用無菌管收集│·。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)│·。仔細收集上清│·。檢測細胞內的成份時╃↟,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液╃↟,細胞濃度達到100萬/ml左右│·。透過反覆凍融╃↟,以使細胞破壞並放出細胞內成份│·。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)│·。仔細收集上清│·。儲存過程中如有沉澱形成╃↟,應再次離心│·。

5. 組織標本▩▩:切割標本後╃↟,稱取重量│·。加入一定量的PBS╃↟,PH7.4│·。用液氮迅速冷凍儲存備用│·。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度│·。加入一定量的PBS(PH7.4)╃↟,用手工或勻漿器將標本勻漿充分│·。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)│·。仔細收集上清│·。分裝後一份待檢測╃↟,其餘冷凍備用│·。

6. 標本採集後儘早進行提取╃↟,提取按相關文獻進行╃↟,提取後應儘快進行實驗│·。若不能馬上進行試驗╃↟,可將標本放於-20℃儲存╃↟,但應避免反覆凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品╃↟,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性│·。

人雌二醇(E2) ELISA試劑盒

操作步驟

1. 標準品的稀釋與加樣▩▩:在酶標包被板上設標準品孔10孔╃↟,在*✘│↟││、第二孔中分別加標準品100μl╃↟,然後在*✘│↟││、第二孔中加標準品稀釋液50μl╃↟,混勻;然後從*孔✘│↟││、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔╃↟,再在第三✘│↟││、第四孔分別加標準品稀釋液50μl╃↟,混勻;然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉╃↟,再各取50μl分別加到第五✘│↟││、第六孔中╃↟,再在第五✘│↟││、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul╃↟,混勻;混勻後從第五✘│↟││、第六孔中各取50μl分別加到第七✘│↟││、第八孔中╃↟,再在第七✘│↟││、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl╃↟,混勻後從第七✘│↟││、第八孔中分別取50μl加到第九✘│↟││、第十孔中╃↟,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl╃↟,混勻後從第九第十孔中各取50μl棄掉│·。(稀釋後各孔加樣量都為50μl╃↟,濃度分別為30ng/L╃↟,20ng/L ╃↟,10ng/L╃↟,5ng/L╃↟, 2.5ng/L)│·。

2. 加樣▩▩:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑╃↟,其餘各步操作相同)✘│↟││、待測樣品孔│·。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl╃↟,然後再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)│·。加樣將樣品加於酶標板孔底部╃↟,儘量不觸及孔壁╃↟,輕輕晃動混勻│·。

3. 溫育▩▩:用封板膜封板後置37℃溫育30分鐘│·。

4. 配液▩▩:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋後備用│·。

5. 洗滌▩▩:小心揭掉封板膜╃↟,棄去液體╃↟,甩幹╃↟,每孔加滿洗滌液╃↟,靜置30秒後棄去╃↟,如此重複5次╃↟,拍幹│·。

6. 加酶▩▩:每孔加入酶標試劑50μl╃↟,空白孔除外│·。

7. 溫育▩▩:操作同3│·。

8. 洗滌▩▩:操作同5│·。

9. 顯色▩▩:每孔先加入顯色劑A50μl╃↟,再加入顯色劑B50μl╃↟,輕輕震盪混勻╃↟,37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止▩▩:每孔加終止液50μl╃↟,終止反應(此時藍色立轉黃色)│·。

11. 測定▩▩:以空白空調零╃↟,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)│·。 測定應在加終止液後15分鐘以內進行│·。

注意事項▩▩:

1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘後方可使用╃↟,酶標包被板開封后如未用完╃↟,板條應裝入密封袋中儲存│·。

2. 濃洗滌液可能會有結晶析出╃↟,稀釋時可在水浴中加溫助溶╃↟,洗滌時不影響結果│·。

3. 各步加樣均應使用加樣器╃↟,並經常校對其準確性╃↟,以避免試驗誤差│·。一次加樣時間控制在5分鐘內╃↟,如標本數量多╃↟,推薦使用排槍加樣│·。

4. 請每次測定的同時做標準曲線╃↟,做復孔│·。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大於標準品孔*孔的OD值)╃↟,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)後再測定╃↟,計算時請zui後乘以總稀釋倍數(×n×5)│·。

5. 封板膜只限一次性使用╃↟,以避免交叉汙染│·。

6. 底物請避光儲存│·。

7. 嚴格按照說明書的操作進行╃↟,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8. 所有樣品╃↟,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理│·。

9. 本試劑不同批號組分不得混用│·。

10. 如與英文說明書有異╃↟,以英文說明書為準│·。

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