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促腎上腺皮質激素(ACTH)試劑盒

促腎上腺皮質激素(ACTH)試劑盒

簡要描述₪╃:

上海信帆生物科技有限公司是一家的ELISA試劑盒供應商↟✘◕,提供ELISA試劑盒↟✘◕,生化法試劑盒,放免試劑盒等.全程提供技術指導↟✘◕,提供售後服務↟✘◕,有質量問題免費包退換↟✘◕,免除您實驗的後顧之憂▩·☁。如有需要歡迎↟✘◕,也可以索要試劑盒說明書▩·☁。

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促腎上腺皮質激素(ACTH)試劑盒

本試劑盒用於測定血清↟✘◕,血漿及相關液體樣本中小鼠雌激素(E)的含量▩·☁。

ELISA技術原理₪╃:以免疫學反應為基礎↟✘◕,將抗原✘↟▩☁、抗體的特異性反應與酶對底

物的高效催化作用相結合起來

1. 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記▩·☁。

2. 結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性▩·☁。

3. 酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性↟✘◕,又保留酶的活性▩·☁。

4. 受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應▩·☁。再加入酶標記 的抗原或抗體↟✘◕,也透過反應而結合在固相載體上▩·☁。

5. 此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例▩·☁。

6. 加入酶反應的底物後↟✘◕,底物被酶催化成為有色產物↟✘◕,產物的量 與標本中受檢物質的量直接相關↟✘◕,故可根據呈色的深淺進行定 性或定量分析▩·☁。測定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水 平)↟✘◕,並且重複性好▩·☁。

 

 

樣本處理及要求₪╃:

1. 血清₪╃:室溫血液自然凝固10-20分鐘↟✘◕,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)▩·☁。仔細收集上清↟✘◕,儲存過程中如出現沉澱↟✘◕,應再次離心▩·☁。

2. 血漿₪╃:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑↟✘◕,混合10-20分鐘後↟✘◕,離心20分鐘左右(2000-3000/分)▩·☁。仔細收集上清↟✘◕,儲存過程中如有沉澱形成↟✘◕,應該再次離心▩·☁。

3. 尿液₪╃:用無菌管收集↟✘◕,離心20分鐘左右(2000-3000/分)▩·☁。仔細收集上清↟✘◕,儲存過程中如有沉澱形成↟✘◕,應再次離心▩·☁。胸腹水✘↟▩☁、腦脊液參照實行▩·☁。

4. 細胞培養上清₪╃:檢測分泌性的成份時↟✘◕,用無菌管收集▩·☁。離心20分鐘左右(2000-3000/分)▩·☁。仔細收集上清▩·☁。檢測細胞內的成份時↟✘◕,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液↟✘◕,細胞濃度達到100/ml左右▩·☁。透過反覆凍融↟✘◕,以使細胞破壞並放出細胞內成份▩·☁。離心20分鐘左右(2000-3000/分)▩·☁。仔細收集上清▩·☁。儲存過程中如有沉澱形成↟✘◕,應再次離心▩·☁。

5. 組織標本₪╃:切割標本後↟✘◕,稱取重量▩·☁。加入一定量的PBS↟✘◕,PH7.4▩·☁。用液氮迅速冷凍儲存備用▩·☁。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度▩·☁。加入一定量的PBSPH7.4)↟✘◕,用手工或勻漿器將標本勻漿充分▩·☁。離心20分鐘左右(2000-3000/分)▩·☁。仔細收集上清▩·☁。分裝後一份待檢測↟✘◕,其餘冷凍備用▩·☁。

6. 標本採集後儘早進行提取↟✘◕,提取按相關文獻進行↟✘◕,提取後應儘快進行實驗▩·☁。若不能馬上進行試驗↟✘◕,可將標本放於-20℃儲存↟✘◕,但應避免反覆凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品↟✘◕,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性▩·☁。

促腎上腺皮質激素(ACTH)試劑盒

 

操作步驟

1. 標準品的稀釋與加樣₪╃:在酶標包被板上設標準品孔10孔↟✘◕,在*✘↟▩☁、第二孔中分別加標準品100μl↟✘◕,然後在*✘↟▩☁、第二孔中加標準品稀釋液50μl↟✘◕,混勻;然後從*孔✘↟▩☁、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔↟✘◕,再在第三✘↟▩☁、第四孔分別加標準品稀釋液50μl↟✘◕,混勻;然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉↟✘◕,再各取50μl分別加到第五✘↟▩☁、第六孔中↟✘◕,再在第五✘↟▩☁、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul↟✘◕,混勻;混勻後從第五✘↟▩☁、第六孔中各取50μl分別加到第七✘↟▩☁、第八孔中↟✘◕,再在第七✘↟▩☁、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl↟✘◕,混勻後從第七✘↟▩☁、第八孔中分別取50μl加到第九✘↟▩☁、第十孔中↟✘◕,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl↟✘◕,混勻後從第九第十孔中各取50μl棄掉▩·☁。(稀釋後各孔加樣量都為50μl↟✘◕,濃度分別為30ng/L↟✘◕,20ng/L ↟✘◕,10ng/L↟✘◕,5ng/L↟✘◕, 2.5ng/L)▩·☁。

2. 加樣₪╃:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑↟✘◕,其餘各步操作相同)✘↟▩☁、待測樣品孔▩·☁。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl↟✘◕,然後再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)▩·☁。加樣將樣品加於酶標板孔底部↟✘◕,儘量不觸及孔壁↟✘◕,輕輕晃動混勻▩·☁。

3. 溫育₪╃:用封板膜封板後置37℃溫育30分鐘▩·☁。

4. 配液₪╃:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋後備用▩·☁。

5. 洗滌₪╃:小心揭掉封板膜↟✘◕,棄去液體↟✘◕,甩幹↟✘◕,每孔加滿洗滌液↟✘◕,靜置30秒後棄去↟✘◕,如此重複5次↟✘◕,拍幹▩·☁。

6. 加酶₪╃:每孔加入酶標試劑50μl↟✘◕,空白孔除外▩·☁。

7. 溫育₪╃:操作同3▩·☁。

8. 洗滌₪╃:操作同5▩·☁。

9. 顯色₪╃:每孔先加入顯色劑A50μl↟✘◕,再加入顯色劑B50μl↟✘◕,輕輕震盪混勻↟✘◕,37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止₪╃:每孔加終止50μl↟✘◕,終止反應(此時藍色立轉黃色)▩·☁。

11. 測定₪╃:以空白空調零↟✘◕,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)▩·☁。 測定應在加終止液後15分鐘以內進行▩·☁。

注意事項₪╃:

1 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘後方可使用↟✘◕,酶標包被板開封后如未用完↟✘◕,板條應裝入密封袋中儲存▩·☁。

2 濃洗滌液可能會有結晶析出↟✘◕,稀釋時可在水浴中加溫助溶↟✘◕,洗滌時不影響結果▩·☁。

3 各步加樣均應使用加樣器↟✘◕,並經常校對其準確性↟✘◕,以避免試驗誤差▩·☁。一次加樣時間控制在5分鐘內↟✘◕,如標本數量多↟✘◕,推薦使用排槍加樣▩·☁。

4 請每次測定的同時做標準曲線↟✘◕,做復孔▩·☁。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大於標準品孔*孔的OD值)↟✘◕,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)後再測定↟✘◕,計算時請zui後乘以總稀釋倍數(×n×5)▩·☁。

5 封板膜只限一次性使用↟✘◕,以避免交叉汙染▩·☁。

6 底物請避光儲存▩·☁。

7 嚴格按照說明書的操作進行↟✘◕,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8 所有樣品↟✘◕,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理▩·☁。

9 本試劑不同批號組分不得混用▩·☁。

10. 如與英文說明書有異↟✘◕,以英文說明書為準▩·☁。

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