促腎上腺皮質激素(ACTH)試劑盒

促腎上腺皮質激素(ACTH)試劑盒

本試劑盒用於測定血清◕·☁，血漿及相關液體樣本中小鼠雌激素(E)的含量₪↟•│。

ELISA技術原理│·₪╃：以免疫學反應為基礎◕·☁，將抗原·│☁·、抗體的特異性反應與酶對底

物的高效催化作用相結合起來

1. 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記₪↟•│。

2. 結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性₪↟•│。

3. 酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性◕·☁，又保留酶的活性₪↟•│。

4. 受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應₪↟•│。再加入酶標記 的抗原或抗體◕·☁，也透過反應而結合在固相載體上₪↟•│。

5. 此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例₪↟•│。

6. 加入酶反應的底物後◕·☁，底物被酶催化成為有色產物◕·☁，產物的量 與標本中受檢物質的量直接相關◕·☁，故可根據呈色的深淺進行定 性或定量分析₪↟•│。測定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水 平）◕·☁，並且重複性好₪↟•│。

樣本處理及要求│·₪╃：

1. 血清│·₪╃：室溫血液自然凝固10-20分鐘◕·☁，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）₪↟•│。仔細收集上清◕·☁，儲存過程中如出現沉澱◕·☁，應再次離心₪↟•│。

2. 血漿│·₪╃：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑◕·☁，混合10-20分鐘後◕·☁，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）₪↟•│。仔細收集上清◕·☁，儲存過程中如有沉澱形成◕·☁，應該再次離心₪↟•│。

3. 尿液│·₪╃：用無菌管收集◕·☁，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）₪↟•│。仔細收集上清◕·☁，儲存過程中如有沉澱形成◕·☁，應再次離心₪↟•│。胸腹水·│☁·、腦脊液參照實行₪↟•│。

4. 細胞培養上清│·₪╃：檢測分泌性的成份時◕·☁，用無菌管收集₪↟•│。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）₪↟•│。仔細收集上清₪↟•│。檢測細胞內的成份時◕·☁，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液◕·☁，細胞濃度達到100萬/ml左右₪↟•│。透過反覆凍融◕·☁，以使細胞破壞並放出細胞內成份₪↟•│。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）₪↟•│。仔細收集上清₪↟•│。儲存過程中如有沉澱形成◕·☁，應再次離心₪↟•│。

5. 組織標本│·₪╃：切割標本後◕·☁，稱取重量₪↟•│。加入一定量的PBS◕·☁，PH7.4₪↟•│。用液氮迅速冷凍儲存備用₪↟•│。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度₪↟•│。加入一定量的PBS（PH7.4）◕·☁，用手工或勻漿器將標本勻漿充分₪↟•│。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）₪↟•│。仔細收集上清₪↟•│。分裝後一份待檢測◕·☁，其餘冷凍備用₪↟•│。

6. 標本採集後儘早進行提取◕·☁，提取按相關文獻進行◕·☁，提取後應儘快進行實驗₪↟•│。若不能馬上進行試驗◕·☁，可將標本放於-20℃儲存◕·☁，但應避免反覆凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品◕·☁，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性₪↟•│。

促腎上腺皮質激素(ACTH)試劑盒

操作步驟

1. 標準品的稀釋與加樣│·₪╃：在酶標包被板上設標準品孔10孔◕·☁，在*·│☁·、第二孔中分別加標準品100μl◕·☁，然後在*·│☁·、第二孔中加標準品稀釋液50μl◕·☁，混勻；然後從*孔·│☁·、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔◕·☁，再在第三·│☁·、第四孔分別加標準品稀釋液50μl◕·☁，混勻；然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉◕·☁，再各取50μl分別加到第五·│☁·、第六孔中◕·☁，再在第五·│☁·、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul◕·☁，混勻；混勻後從第五·│☁·、第六孔中各取50μl分別加到第七·│☁·、第八孔中◕·☁，再在第七·│☁·、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl◕·☁，混勻後從第七·│☁·、第八孔中分別取50μl加到第九·│☁·、第十孔中◕·☁，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl◕·☁，混勻後從第九第十孔中各取50μl棄掉₪↟•│。（稀釋後各孔加樣量都為50μl◕·☁，濃度分別為30ng/L◕·☁，20ng/L ◕·☁，10ng/L◕·☁，5ng/L◕·☁， 2.5ng/L）₪↟•│。

2. 加樣│·₪╃：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑◕·☁，其餘各步操作相同）·│☁·、待測樣品孔₪↟•│。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl◕·☁，然後再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）₪↟•│。加樣將樣品加於酶標板孔底部◕·☁，儘量不觸及孔壁◕·☁，輕輕晃動混勻₪↟•│。

3. 溫育│·₪╃：用封板膜封板後置37℃溫育30分鐘₪↟•│。

4. 配液│·₪╃：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋後備用₪↟•│。

5. 洗滌│·₪╃：小心揭掉封板膜◕·☁，棄去液體◕·☁，甩幹◕·☁，每孔加滿洗滌液◕·☁，靜置30秒後棄去◕·☁，如此重複5次◕·☁，拍幹₪↟•│。

6. 加酶│·₪╃：每孔加入酶標試劑50μl◕·☁，空白孔除外₪↟•│。

7. 溫育│·₪╃：操作同3₪↟•│。

8. 洗滌│·₪╃：操作同5₪↟•│。

9. 顯色│·₪╃：每孔先加入顯色劑A50μl◕·☁，再加入顯色劑B50μl◕·☁，輕輕震盪混勻◕·☁，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止│·₪╃：每孔加終止液50μl◕·☁，終止反應（此時藍色立轉黃色）₪↟•│。

11. 測定│·₪╃：以空白空調零◕·☁，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）₪↟•│。 測定應在加終止液後15分鐘以內進行₪↟•│。

注意事項│·₪╃：

1． 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘後方可使用◕·☁，酶標包被板開封后如未用完◕·☁，板條應裝入密封袋中儲存₪↟•│。

2． 濃洗滌液可能會有結晶析出◕·☁，稀釋時可在水浴中加溫助溶◕·☁，洗滌時不影響結果₪↟•│。

3． 各步加樣均應使用加樣器◕·☁，並經常校對其準確性◕·☁，以避免試驗誤差₪↟•│。一次加樣時間控制在5分鐘內◕·☁，如標本數量多◕·☁，推薦使用排槍加樣₪↟•│。

4． 請每次測定的同時做標準曲線◕·☁，做復孔₪↟•│。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大於標準品孔*孔的OD值）◕·☁，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）後再測定◕·☁，計算時請zui後乘以總稀釋倍數（×n×5）₪↟•│。

5． 封板膜只限一次性使用◕·☁，以避免交叉汙染₪↟•│。

6． 底物請避光儲存₪↟•│。

7． 嚴格按照說明書的操作進行◕·☁，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8． 所有樣品◕·☁，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理₪↟•│。

9． 本試劑不同批號組分不得混用₪↟•│。

10. 如與英文說明書有異◕·☁，以英文說明書為準₪↟•│。

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