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腫瘤壞死因子elisa試劑盒

腫瘤壞死因子elisa試劑盒

簡要描述☁╃:

人腫瘤壞死因子αELISA試劑盒 人TNF-α試劑盒由上海信帆生物提供•▩▩。人TNF-α試劑盒靈敏度高☁₪▩,酶聯免疫技術服務☁₪▩,提供專業代測服務☁₪▩,享受零運費運輸☁₪▩,售後完善•▩▩。ELISA試劑盒,品質保證!售前售中售後全程提供技術指導,有質量問題免費包退包換!瞭解產品詳情☁₪▩,諮詢•▩▩。人腫瘤壞死因子αELISA試劑盒 人TNF-α試劑盒7折促銷

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產品中文☁╃: 腫瘤壞死因子elisa試劑盒
產品英文☁╃: Human Tumor necrosis factor α,TNF-α ELISA kit 
貨號☁╃: XF00122B
規格☁╃: 48T/96T
保質期☁╃: 6個月
儲存條件☁╃: 2到8度
                 
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腫瘤壞死因子elisa試劑盒
                 
ELISA技術原理☁╃:以免疫學反應為基礎☁₪▩,將抗原··、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來.
1. 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記•▩▩。
2. 結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性•▩▩。
3. 酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性☁₪▩,又保留酶的活性•▩▩。
4. 受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應•▩▩。再加入酶標記 的抗原或抗體☁₪▩,也透過反應而結合在固相載體上•▩▩。
5. 此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例•▩▩。
6. 加入酶反應的底物後☁₪▩,底物被酶催化成為有色產物☁₪▩,產物的量 與標本中受檢物質的量直接相關☁₪▩,故可根據呈色的深淺進行定 性或定量分析•▩▩。測定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水 平)☁₪▩,並且重複性好•▩▩。
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樣本處理及要求☁╃:
1. 血清☁╃:室溫血液自然凝固10-20分鐘☁₪▩,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)•▩▩。仔細收集上清☁₪▩,儲存過程中如出現沉澱☁₪▩,應再次離心•▩▩。
2. 血漿☁╃:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑☁₪▩,混合10-20分鐘後☁₪▩,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)•▩▩。仔細收集上清☁₪▩,儲存過程中如有沉澱形成☁₪▩,應該再次離心•▩▩。
3. 尿液☁╃:用無菌管收集☁₪▩,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)•▩▩。仔細收集上清☁₪▩,儲存過程中如有沉澱形成☁₪▩,應再次離心•▩▩。胸腹水··、腦脊液參照實行•▩▩。
4. 細胞培養上清☁╃:檢測分泌性的成份時☁₪▩,用無菌管收集•▩▩。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)•▩▩。仔細收集上清•▩▩。檢測細胞內的成份時☁₪▩,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液☁₪▩,細胞濃度達到100萬/ml左右•▩▩。透過反覆凍融☁₪▩,以使細胞破壞並放出細胞內成份•▩▩。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)•▩▩。仔細收集上清•▩▩。儲存過程中如有沉澱形成☁₪▩,應再次離心•▩▩。
5. 組織標本☁╃:切割標本後☁₪▩,稱取重量•▩▩。加入一定量的PBS☁₪▩,PH7.4•▩▩。用液氮迅速冷凍儲存備用•▩▩。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度•▩▩。加入一定量的PBS(PH7.4)☁₪▩,用手工或勻漿器將標本勻漿充分•▩▩。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)•▩▩。仔細收集上清•▩▩。分裝後一份待檢測☁₪▩,其餘冷凍備用•▩▩。
6. 標本採集後儘早進行提取☁₪▩,提取按相關文獻進行☁₪▩,提取後應儘快進行實驗•▩▩。若不能馬上進行試驗☁₪▩,可將標本放於-20℃儲存☁₪▩,但應避免反覆凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品☁₪▩,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性•▩▩。
                 
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操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣☁╃:在酶標包被板上設標準品孔10孔☁₪▩,在*··、第二孔中分別加標準品100μl☁₪▩,然後在*··、第二孔中加標準品稀釋液50μl☁₪▩,混勻;然後從*孔··、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔☁₪▩,再在第三··、第四孔分別加標準品稀釋液50μl☁₪▩,混勻;然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉☁₪▩,再各取50μl分別加到第五··、第六孔中☁₪▩,再在第五··、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul☁₪▩,混勻;混勻後從第五··、第六孔中各取50μl分別加到第七··、第八孔中☁₪▩,再在第七··、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl☁₪▩,混勻後從第七··、第八孔中分別取50μl加到第九··、第十孔中☁₪▩,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl☁₪▩,混勻後從第九第十孔中各取50μl棄掉•▩▩。(稀釋後各孔加樣量都為50μl☁₪▩,濃度分別為30ng/L☁₪▩,20ng/L ☁₪▩,10ng/L☁₪▩,5ng/L☁₪▩, 2.5ng/L)•▩▩。
2. 加樣☁╃:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑☁₪▩,其餘各步操作相同)··、待測樣品孔•▩▩。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl☁₪▩,然後再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)•▩▩。加樣將樣品加於酶標板孔底部☁₪▩,儘量不觸及孔壁☁₪▩,輕輕晃動混勻•▩▩。
3. 溫育☁╃:用封板膜封板後置37℃溫育30分鐘•▩▩。
4. 配液☁╃:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋後備用•▩▩。
5. 洗滌☁╃:小心揭掉封板膜☁₪▩,棄去液體☁₪▩,甩幹☁₪▩,每孔加滿洗滌液☁₪▩,靜置30秒後棄去☁₪▩,如此重複5次☁₪▩,拍幹•▩▩。
6. 加酶☁╃:每孔加入酶標試劑50μl☁₪▩,空白孔除外•▩▩。
7. 溫育☁╃:操作同3•▩▩。
8. 洗滌☁╃:操作同5•▩▩。
9. 顯色☁╃:每孔先加入顯色劑A50μl☁₪▩,再加入顯色劑B50μl☁₪▩,輕輕震盪混勻☁₪▩,37℃避光顯色15分鐘. 
10. 終止☁╃:每孔加終止液50μl☁₪▩,終止反應(此時藍色立轉黃色)•▩▩。
11. 測定☁╃:以空白空調零☁₪▩,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)•▩▩。 測定應在加終止液後15分鐘以內進行•▩▩。
注意事項☁╃:
1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘後方可使用☁₪▩,酶標包被板開封后如未用完☁₪▩,板條應裝入密封袋中儲存•▩▩。
2. 濃洗滌液可能會有結晶析出☁₪▩,稀釋時可在水浴中加溫助溶☁₪▩,洗滌時不影響結果•▩▩。
3. 各步加樣均應使用加樣器☁₪▩,並經常校對其準確性☁₪▩,以避免試驗誤差•▩▩。一次加樣時間控制在5分鐘內☁₪▩,如標本數量多☁₪▩,推薦使用排槍加樣•▩▩。
4. 請每次測定的同時做標準曲線☁₪▩,做復孔•▩▩。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大於標準品孔*孔的OD值)☁₪▩,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)後再測定☁₪▩,計算時請zui後乘以總稀釋倍數(×n×5)•▩▩。
5. 封板膜只限一次性使用☁₪▩,以避免交叉汙染•▩▩。
6. 底物請避光儲存•▩▩。
7. 嚴格按照說明書的操作進行☁₪▩,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8. 所有樣品☁₪▩,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理•▩▩。
9. 本試劑不同批號組分不得混用•▩▩。
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